宠物细胞学检查的方法和原理

2021-09-03 07:37:08by 三三6

简述主要免疫细胞分离方法和分离原理？免疫磁珠法分离细胞原理：免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单

简述主要免疫细胞分离方法和分离原理？

免疫磁珠法分离细胞原理：免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。免疫磁珠法分为阳性分离法和阴性分离法：阳性分离法－磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞阴性分离法－磁珠结合不需要的细胞，游离于磁场的细胞为所需细胞一般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用行更多。BD™Imag磁珠：·大小在0.1－0.45mm·包被了BDPharmingen生产的高质量单抗·磁珠已为白细胞亚群的阳性和阴性分离法所优化·用于BD™IMagnetdirectmagnet将包被了特异性单抗的BDIMag磁珠加入细胞悬液，磁珠特异性地与有相应抗原的细胞亚群结合，通过BD™IMagnetdirectmagnet分离得到的连有BDIMag磁珠的细胞可直接用于功能试验和用流式细胞仪检测。缺点：•对细胞造成机械压力，影响其生物学活性，不利于分离后培养•纯度低•容易阻塞FCM的喷嘴BDIMag吸收大磁珠和小磁珠分离系统的优点，开发出直径约200nm中等大小磁珠。•技术简单，分离在普通的试管中完成•易于增大细胞用量•对细胞温和，不影响细胞功能及其分离后培养，可直接上流式•纯度高，***率高•成本低此外，Mouselineagepanel中biotin标记的抗体还可用于FCM分析细胞表面抗原，以及进行细胞/***免疫荧光实验。BD提供2种免疫磁珠：·包被了针对白细胞亚群的单抗的磁珠·包被了链霉亲和素（strept***idin）的磁珠：此种情况下，在实验系统中加入生物素标记的单抗，磁珠通过strept***idin与生物素标记的单抗结合，单抗与细胞表面相应抗原特异性结合而使细胞被磁珠间接捕获，从而达到分离。这种磁珠使研究者可根据自己需要选择生物素标记的各种单抗去分离目的细胞，应用范围更广泛，使用更灵活。不同物种磁珠分离试剂人：CD3,CD4,CD8,CD14,CD19；小鼠：CD4,CD8a,CD14,CD45R/B220,CD90.2(Thy1.2),CD11b,Ly-6G.ë利用Strept***idin连接的磁珠，只需选配biotin标记的所需单抗,就能分离更多种类细胞新货聚焦：现在，BDPMG又推出用于分离小鼠造血干细胞/祖细胞的新试剂mouselineagepanel。其中包括5种biotin标记单抗，这些单抗能结合小鼠造血细胞的主要分化系细胞:T、B淋巴细胞，单核/巨噬细胞，粒细胞和红细胞。将这组试剂与Strept***idinPlu***D™IMagParticles(557812)联合使用，就能通过免疫磁性分离法去除小鼠***造血细胞的主要分化系细胞，从而富集到造血干细胞和祖细胞（阴性片断）。MouseLineagePanel（559971）：（5×2ml/vial）可分离109Mouse***细胞1)Biotin-anti-mouseCD3e(CD3echain)；2)Biotin-anti-mouseCD11b；3)Biotin-anti-mouseCD45R/B220；4)Biotin-anti-mouseLy-6GandLy-6C(Gr-1)；5)Biotin-anti-mouseTER-119/ErythroidCells(Ly-76)磁分离细胞的重要指标是：纯度和得率，这取决于磁珠所连接单抗的特异性和磁珠大小（磁性），然而太大的磁珠会影响细胞活性，也无法直接上流式。目前市场上有2种磁性细胞分离系统：*Smallparticles(≈50nm)－MACS*Largeparticles(1200~4500nm)－others（如Dynal）小磁珠优点：•对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养•可直接上流式检测，不影响散射光缺点：•需要很强的磁场来分离细胞•分离速度很慢，得率不高•需要一次性的分离柱，不能在普通试管进行•成本昂贵大磁珠•技术简单，分离可在试管中完成•易于增减细胞用量•速度快，得率高•成本低

液基细胞学检查方法是怎样进行的呢

液基细胞学检查方法是怎样进行的液基细胞学检查是采用液基薄层细胞检测系统检测宫颈细胞并进行细胞学分类诊断，它是目前国际上较先进的一种宫颈癌细胞学检查技术，与传统的宫颈刮片巴氏涂片检查相比明显提高了标本的满意度及宫颈异常细胞检出率。宫颈防癌细胞学检查对宫颈癌细胞的检出率为100%，同时能发现部分癌前病变，微生物感染如霉菌、滴虫、病毒、衣原体等。所以液基技术是应用于妇女宫颈癌筛查的一项先进的技术。2意义编辑液基测试明显提高了***颈细胞样本的检测质量。常规巴氏涂片由于血液、粘液、炎症等因素影响,常使样本模糊,存在检测误差.在临床实验中，液基测试***颈细胞样本的数量，可以明显提高癌变细胞的检测率，并相应减少需要重复做巴氏测试的次数，从而降低了患者因被重做测试而引起不必要的担心。常规巴氏涂片误差的减少势必将前期癌变的检测工作提高到一个新的阶段，并使那些早期癌变患者得到及早的、更有效的治疗。3常规巴氏测试的缺点编辑长期以来临床医师与化验技师在宫颈癌筛检方面和常规巴氏涂片方面作过许多***工作。然而收效甚微，误差仍旧不可避免，测试结果仍然不准确。在常规的帕氏涂片测试中，医生需手工将用采集器取得的细胞样本涂在显微片上。这种传统手工方法***的涂片只收集了最多20%的细胞，而80%以上的细胞样本则残留在采样器上并随采样器一起被丢弃。另外，40%以上的涂片会因血液、粘液和炎症***的影响而变得混浊不清，以及固定不及时所引起的人为假象。这些缺点是造成了大多数常规巴氏测试结果不准确的原因。

动物细胞融合的方法原理

诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（离心，震动，电刺激）。某些病毒如：仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白（fusionprotein），可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合，因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变，去掉作用因素之后，质膜恢复原有的有序结构，在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。细胞融合不仅可用于基础研究，而且还有重要的应用价值，在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。而动物细胞融合技术最重要的用途是***单克隆抗体。原理：细胞膜具有一定的流动性