小狗采血方法实验报告-牛血清白蛋白的提取和鉴定方法(设计性实验报告)

牛血清白蛋白的提取和鉴定方法(设计性实验报告)

牛血清白蛋白的提取操作步骤：

1、盐析取离心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS（磷酸盐缓冲生理盐水）稀释血清，摇匀后，逐滴加入pH7.2饱和硫酸铵溶液2mL，边加边摇，充分混匀，然后静止放臵10分钟，再离心（2000r/min）10min，将上清液倾入试管中。

2、取干净的比色板，在各孔内滴加一滴纳氏试剂

3、取玻璃纸一张，折成袋形，将离心后的上清液倒入袋内，用线扎紧上口（注意要留有空隙），用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100mL烧杯内，使透析袋下半部侵入水中，对蛋白液进行透析，常用玻璃棒搅拌袋外（烧杯中）液体，以缩短透析时间。

4、每隔2分钟检查一次，更换蒸馏水多次，用纳氏试剂检查袋外液体的NH4+，观察颜色变化并记录，直至袋内盐分透析完毕。

5、将袋内液体倾入试管，即得牛血清白蛋白溶液。

牛血清白蛋白的鉴定方法：

1、点样取一张膜条，将薄膜无光泽面向下，放入培养皿中的***缓冲液中使膜条充分浸透，取出，用干净滤纸吸去多余的缓冲液，以薄膜的无光泽面距一端1.5㎝处做点样线，将牛血清样品与待测的牛血清白蛋白溶液分别用点样器在同一张薄膜的点样线处不同位置点样。标准液点一次，待测液点三次。

2、电泳将点样后的膜条致于电泳槽架上，放置时膜条无光泽面向下，点样端致于阴极，待平衡5min后，打开电源，调节电源，调节电泳仪的电压为160伏，通电60min，关闭电源后用镊子将模条取出。

3、 染色将膜条直接浸于盛有氨基黑10B的染色液中，染2分钟后取出，立即浸于漂洗液中，分别在漂洗液1、2、3中各漂洗5min，直至背景漂洗干净为止，用滤纸吸干薄膜。

4、鉴定比较样品和待测液中白蛋白在薄膜上的电泳结果，看位置是否一致。

扩展资料：

牛血清白蛋白

牛血清中的简单蛋白，是血液的主要成分（38g/1000ml），分子量68kD。等电点4.8。含氮量16%，含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。

血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。牛血清白蛋白（BSA），又称第五组分，是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为66.430 Da，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot中作为Blocking agent。

参考资料来源：百度百科-牛血清白蛋白

牛血清白蛋白热乙醇法提取工艺：

分离血浆，在牛血中加入枸橼酸钠离心，提取，将收集的血浆放入夹层反应罐内，加热加入辛酸钠，缓慢搅拌，温度在55℃～65℃，加入盐酸调pH值至4.0～6.5，然后加乙醇，过滤，脱盐和浓缩，冻干为成品。

具体为以下步骤：

A、分离血浆，取新鲜牛血放入带制冷功能的离心机中，加入血量的10％的浓度为3.8％的枸橼酸钠，离心，温度在2℃以下，分离血浆、血球，收集血浆，血球另用； B、提取，将血浆放入夹层反应罐内，夹层内加热水，边加热边加入牛血清容积的0.2-0.3％的辛酸钠，缓慢搅拌，温度在55℃～65℃，溶解后调PH值，加入浓度为1摩尔的盐酸，将PH调至4.0～6.5，然后加入血清总量的5.5％的浓度为95％的乙醇，过滤，滤渣弃之； C、脱盐和浓缩，将滤液用20000分子量以下的超滤器洗脱盐类及其它小分子杂质，同时进行浓缩； D、冻干，将浓缩液按冻干曲线冻干，即将浓缩液迅速冷却至-40℃，持续1小时左右，升到-25℃，持续10-20小时，再缓慢升温到0℃，再持续1-4小时升到保存温度20℃。，为成品。

反胶团相转移法:

利用CTAB/正辛醇:***(4:1V/V )反胶团体系对牛血清白蛋白(BSA)进行相转移中,通过对萃取体系水相的pH值、离子强度、两液相的体积比、小分子糖(葡萄糖、蔗糖)及助表面活性剂(直链醇分子)等因素的改变,探讨了BSA在阳离子表面活性剂体系的萃取机理;研究结果表明选择合适的条件提取BSA时,萃取率可达到97％,反萃率达到了85％;找到实现牛血清白蛋白分离提纯的有效方法.